技术简介
蛋白质印迹(Western Blotting),是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品的某种蛋白表达情况的方法。该方法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种常规技术。常用于鉴定某种蛋白,并能对蛋白进行定性和半定量分析。
Western blot技术的一般步骤是将经过SDS-PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。由于Western blot检测技术结合了凝胶电泳的高分辨率和固相免疫测定的特异敏感等多种特点,因此可检测到1-5 ng (最低可到10-100 pg)中等大小的靶蛋白。同时,Western blot技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

实验概况
Western Blot的操作步骤主要包括:蛋白样品收集,电泳,转膜,封闭,一抗孵育,二抗孵育,底物显色等过程。
WB实验流程图片

应用范围
1、半定量或定性检测细胞或组织中目标蛋白的表达情况;
2、从蛋白质混合物中检出目标蛋白质;
3、蛋白-蛋白、蛋白-DNA和蛋白-RNA相互作用的后续分析,并结合组分分离技术,检测目标蛋白的定位情况,为免疫荧光实验的补充;
4、在后基因组时代,将与质谱和蛋白质芯片等其他技术一起相互配合,发挥更重要的作用。

技术特点
1、高分辨率的电泳技术;
2、特异敏感的抗原抗体反应;
3、可以检测1-5ng中等大小的靶蛋白。

客户提供
1、尽可能详细的背景资料,包括蛋白的种属、大小、参考文献等。
2、新鲜样品(组织为100-150 mg/样,细胞>107 个/样),若为冻存样品,请于-70 ℃以下保存并自备干冰以便运输。
3、一抗,并标明来源和稀释度,也可让我公司代买。为保证质量,抗体最好为进口单克隆抗体。

我们提供
1、详细的实验报告及实验记录。
2、剩余的组织样品。
3、根据客户需要提供显影胶片。