服务介绍
       流式细胞术测量钙离子的荧光探针大都是钙螯合剂EDTA的衍生物,有较高的量子产量,并对钙有较高的特异性亲合力。钙离子流式荧光探针本身不能透过 细胞质膜进入细胞内,将它们连洁乙酰甲酯后,可将染料导入细胞,经细胞内的非特异性酯酶水解水解该酯键,释放出染料分子,恢复为不能通过细胞膜的游离酸形 式,进而与细胞内钙结合。通过荧光强度可以敏感地检测出钙离子浓度。

 

1,Fluo-3-Am
       为一新型的高度特异性Ca2+荧光指示剂,可以灵敏地反映细胞内游离钙离子浓度的变化,Fluo-3-Am进入细胞后经非特异性 酯酶脱去Am酯,成为脂溶的Fluo-3留在细胞内,当Fluo-3与细胞内游离钙结合后,其荧光强度是Fluo-3本身的40倍以上,当用480nm波 长激发时,其荧光强度与游离钙离子浓度成正比。

2, FLUO-4- AM
       自从1989 年开发出来,Fluo-3 就广泛应用于钙离子信号途径、流式细胞术、光激活、神经传导、基于细胞的药物筛选等。它的最大优势就是和常规激发波长488nm 兼容,且结合钙离子后荧光增强非常明显(大于100 倍)。
       Fluo-4 是一种将Fluo-3 结构中的Cl 替换成F 的钙荧光探针。由于将Cl 替换成了电子吸引力更强的F,它的最大激发波长会向短波长处偏离10 nm 左右。这个波长更接近于氩激光器的波长,所以用氩激光器激发时,Fluo-4 的荧光强度比Fluo-3 强1 倍。由于Fluo-4 与钙离子的亲和力和Fluo-3 近似(Fluo-3: Kd=0.4 umol/l、Fluo-4: Kd=0.36 umol/l),所以使用上和Fluo-3也基本相同,可以使用流式细胞仪等仪器检测细胞内钙离子浓度的变化。
       Fluo-4-AM 是Fluo-4 的一种乙酰甲酯衍生物,通过培养,能够轻易进入细胞中。AM 进入细胞后会被胞内酯酶所水解,产生的Fluo-4 随后会和钙离子结合并发出荧光。

3, Quest Fluo-8™, AM
       Quest Fluo-8 AM只需要在室温下完成细胞载入,且Quest Fluo-8的荧光亮度是Fluo-4 AM的2倍、Fluo-3 AM的4倍。AAT Bioquest提供一组不同凡响的Quest Fluo-8 试剂,分别以钠盐、钾盐或AM酯的形式提供,它们与Ca2+的结合力各有不同。