细胞具有增殖功能、吞噬功能、分泌功能等多种多样的功能。细胞功能检测近几年随着流式细胞仪技术的开展有了很大的提高,流式细胞仪能快速、定量、多参数检测,能够快速、多维度分析细胞功能。 细胞功能以中性粒细胞、吞噬细胞、淋巴细胞的研究居多。

1, 吞噬功能
吞噬(phagocytosis)是细胞摄取不能跨膜转运机制进入细胞的物质的方式之一。吞噬过程大致分为:识别、接触、结合,最后是内吞与消化,其中正常的接触是关键。 应用于肿瘤的免疫测定、药代动力学和药物机制研究


实例 : 流式细胞荧光微球法检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能
实验前小鼠腹腔注射绵羊血红细胞激活巨噬细胞,实验当天处死小鼠后Hank’s液充分洗出腹腔巨噬细胞,加入预调理过的荧光微球,37℃避光孵育,洗涤弃上清,贴壁细胞吹打均匀上机分析。

2, 氧化爆发反应功能
是机体抗感染的首要机制,呼吸爆发产生是活性氧化物可以清除病原微生物,并有重要的免疫调节能力。

检测方法:
1、过氧化物水平
非荧光分子探针DCFH-DA通过细胞膜,在胞内被脂酶分解形成DCFH,胞浆中H2O2和过氧化物酶氧化DCFH为DCF,DCF呈绿色荧光,荧光强度与细胞氧化产物水平呈正比。

2、O2·ˉ(超氧离阴子)水平
Hydroethidine(HE)在细胞内被O2·ˉ氧化生成英冠产物Ethidium(E+),E+可聚集在细胞内与DNA结合,从而增加荧光强度。

3、谷胱甘肽(GSH)水平
中性粒细胞内的 GSH水平检测是利用mBrB(溴甲烷)可与选择性的与GSH巯基结合,生成强荧光的衍生物。这种方法简单、快速检测出细胞内重要防氧化功能状况。

3, 脱颗粒功能
中性粒细胞内有丰富的颗粒成分,主要包括MPO,阳离子蛋白等。这些颗粒成分通常引起杀菌活性,中性粒细胞激活后颗粒成分的释放,对机体来说相当重要。

检测方法:
原理是利用胞内脱颗粒后与渗入的 FITC标记的相应抗体反应,检测其结合荧光强度。
应用:
常染色体隐性遗传缺陷:中性粒细胞MPO完全或部分缺陷的诊断,慢性白血病诊断,以及感染疾病相关病因研究,药代动力学和药物机制研究。


3, 粘附功能
细胞的粘附功能是一类膜表面糖蛋白以配体-受体特异性结合的方式介导细胞与细胞间、细胞与细胞外基质间的相互接触和结合并调节细胞功能。流式细胞术检测细胞粘附功能,主要是检测细胞粘附分子(cell adhesion molecules,CAMs)的表达水平。

检测方法:
荧光标记相应抗体,流式细胞术检测荧光强度
应用:
肿瘤细胞迁移,炎症反应,药物机制研究