1,微生物异质性
单克隆和由单个克隆生长而来的微生物群体,每一个细胞之间都能在遗传、生理、生化、行为等方面表现出广泛的差异性,这种现象被称为微生物异质性(microbial heterogeneity)。微生物群体异质性现象普遍存在,与微生物群体许多关键功能密切相关。微生物群体中的多种异质性状态需要单细胞水平的分析技术才能被揭示,流式细胞术是获取异质性状态精确分布的重要工具。

不同生长状态的微生物具有复杂、动态的异质性状态分布,其前向散射光、侧向散射光以及紫外光激发的微生物自发荧光水平不同,以区分微生物的差异。

2,微生物活性

微生物存活必然会产生一系列代谢反应,包括氧化还原反应。利用氧化还原性染料与发生反应, 被流式细胞仪特异性识别进而可选择性检测活性菌。

5-cyano- 2,3-ditolyl tetrazolium chloride (CTC)染料是一种无色可渗透细胞膜的物质,在细胞内可被细菌细胞通过电子传递链还原形成易被检测的红色荧光沉淀物质CTF。可以还原CTC并产生红色荧光的细胞即为具有代谢活性的细胞。


3,微生物膜电位

膜电位(Membrane Potential)通常是指以膜相隔的两溶液之间产生的电位差。是指微生物细胞生命活动过程中伴随的电现象,存在于细胞膜两侧的电位差。
bis-oxonol是一种敏感的荧光探针, 可以在不损伤细胞的情况下进行膜电位的分析, 提供了在细胞群内检查单个细胞反应的机会。DiBAC4在细胞极化时进入细胞, 胞浆的荧光由于其结合于胞浆蛋白而增加。细胞代谢较慢甚至死亡时,bis-oxonol荧光染料较弱。